QuikSep LH-20系列葡聚糖凝膠
QuikSep LH-20是在葡聚糖凝膠G-25的基礎上用羥丙基修飾而成的,引入羥丙基后使得該介質同時具備親水性和親脂性,可以使用有機溶劑作為流動相,適合于中藥有效成分的分離純化以及抗生素和化學藥物的精細純化。分離原理結合了凝膠過濾、分配層析、吸附層析的特點,能分離結構非常接近的分子。
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一、?產品簡介

? ? ? ?QuikSep LH-20是在葡聚糖凝膠G-25的基礎上用羥丙基修飾而成的,引入羥丙基后使得該介質同時具備親水性和親脂性,可以使用有機溶劑作為流動相,適合于中藥有效成分的分離純化以及抗生素和化學藥物的精細純化。分離原理結合了凝膠過濾、分配層析、吸附層析的特點,能分離結構非常接近的分子。


二、?QuikSep LH-20技術參數


顆粒大?。ǜ桑?/span>

40~120μm

平均顆粒大?。ǜ桑?

80μm

平均顆粒大?。瘢?/span>

在不同溶液中的差別大

最大流速(cm/h

和壓力成正比

排阻極限++

4kd(線性分子),5kd(球狀分子)

外觀

白色或者灰白色粉狀固體

耐壓

0.3MPa

pH穩定性

2~13

注:+顆粒大小呈正態分布,在該范圍內的顆粒占總數的85%以上

? ? ? ?++不同溶液中會有差異,本數據為在PBS 中顆粒大小


QuikSep LH-20在不同溶劑中溶脹比列表

溶劑

溶脹比

溶劑

溶脹比

二甲基亞砜

4.4~4.6

丙醇

3.7~4.0

吡啶

4.2~4.4

乙醇

3.6~3.9

4.0~4.4

異丁醇

3.6~3.9

二甲基甲酰胺

4.0~4.4

建酰胺

3.6~3.9

甲醇

3.9~4.3

二氯甲烷

3.6~3.9

二氯乙烯

3.8~4.1

丁醇

3.5~3.8

氯仿

3.8~4.1

異丙醇

3.3~3.6

四氫呋喃

3.3~3.6

丙酮

2.4~2.6

乙腈

2.2~2.4



注:溶脹比為每克干粉溶脹后的體積(ml。


三、使用方法

由于介質是以干粉的方式提供的,所以需要先溶脹,然后裝填層析柱后使用。

3.1 溶脹

根據層析柱的體積計算需要的QuikSep LH-20干粉的量

?? 干粉的量(g=(柱體積×1.15)÷溶脹比

? 將介質倒入5倍干粉重量的相應溶劑中并稍作攪拌,溶脹一般需要4h 以上(注意在溶脹過程中不要使用磁力攪拌子攪拌,使用磁力攪拌子會導致介質顆粒破裂),常溫溶脹后最好在負壓下脫氣。

溶脹完成后(高溫溶脹需等到冷卻到室溫),去掉部分上層清液,使沉降膠的體積占總體積的50%~75%,攪勻備用。

3.2 裝柱

注意:由于QuikSep LH-20經常在有機溶劑下使用,請確保您所使用的層析柱能耐受相應的有機溶劑。高濃度的有機溶劑會導致實驗室型柱子外殼破裂,在裝柱過程中注意不要讓有機溶劑接觸到實驗室型柱子外殼。在使用二氯甲烷或者三氯甲烷裝柱的時候,介質會浮在液體表面,可以采用雙柱頭從下向上裝柱。


? 采用與溶脹液一致的液體作為裝柱緩沖液。

取清洗干凈的層析柱,排凈柱底膜氣泡,并在柱子底部保留1cm高左右的液柱,調整柱子使其垂直于地面。

將攪勻后的膠懸液一次緩慢倒入層析柱內,注意不要帶入氣泡,倒入后用塑料棒再次攪勻。

將上柱頭連接到層析系統或者蠕動泵,排凈上柱頭篩網下面的氣泡,將柱頭放入層析柱內,旋緊密封旋鈕。

設定裝柱流速,由于QuikSep LH-20凝膠硬度比較大,流速和壓力幾乎成正比,在3bar 以內的壓力下不會對介質造成破壞,應以盡可能大的流速完成裝柱。

打開柱子下端封頭,按照上面設定的流速啟動蠕動泵或者層析系統。設定柱內壓力小于層析柱最大耐壓,若在裝柱過程中超壓,需要適當降低流速。

待膠懸液沉降完成需要再保持30min 以上,標記膠面的位置,然后停泵。

去掉裝柱器(如果有的話),將柱頭下降至膠面上約0.5cm 的位置,按照上面的流速繼續壓膠一次,標記膠面的位置。

停泵,稍微放松柱頭密封圈,確保柱頭上的閥門是關閉的,柱底的閥門是打開的,下壓膠面至標記位置下面5mm,旋緊柱頭密封圈,關閉底部閥門,裝柱完成。

3.3 柱效評價

柱效測定可以采用丙酮作為指示劑或者NaCl 作為指示劑,按照下表配制指示劑溶液和流動相。


丙酮法測柱效

NaCl法測柱效

樣品

1.0%v/v)丙酮水溶液

2M ? NaCl(溶于水)

樣品體積

1.0%柱體積

1.0%柱體積

流動相

0.4M ? NaCl

流速

30cm/h

30cm/h

檢測器

UV ? 280nm

電導率


計算柱效:

根據UV或者電導率曲線計算理論塔板高度(HETP)、理論塔板數(N)和非對稱因子(As),公式如下:

11.png


HETP=L/N

N=5.54(VR/Wh)2

其中:VR=保留體積

Wh=半高峰寬

L=柱高

N=理論塔板數

VRWh的單位應一致;

As=b/a

其中:

a= 10%峰高處的第一個半峰寬

b= 10%峰高處的第二個半峰寬

結果評價:

由以上公式計算出的HETP 的數值若大于三倍溶脹后的介質平均顆粒大小且非對稱因子在0.8~1.8 則判定為合格。對于不理想的柱效需要分析原因并重新裝柱。

3.4 層析方法

緩沖液選擇:QuikSep LH-20 可以在各種水相或者有機相中運行,根據被分離物種的性質和分配層析的原理選擇流動相,常選用乙酸乙酯、甲醇、水三種物質的混合溶液,根據目的物的出峰時間調整流動相中各物質的比例。

流速:以柱高80cm 為例,一般推薦的流速約為30~90cm/h,柱高越大流速越慢。

樣品及上樣量:為防止樣品堵塞柱子,在上樣前樣品需要用0.45μm 的微孔濾膜過濾,若目的物和雜質差別比較小,上樣體積通常按照柱體積的1%~5%上樣。


四、分離效果的影響因素

QuikSep LH-20凝膠介質分離效果受多種原理影響,

? 凝膠過濾,若目的物和介質沒有相互作用則依據分子篩的原理進行分離,緩沖液的選擇主要考慮目的物的可溶性,影響因素參考凝膠過濾的影響因素。著重考慮柱效、流速、上樣量等因素

? 分配色譜,根據相似相容的原理,通過調整流動相的極性,使目的物在流動相和固定相中合理分配。

? 吸附作用,交聯劑中含有的少量醚氧基以及羥丙基可以通過疏水的作用結合生物分子,羥丙基的羥基可以通過氫鍵的作用結合生物分子,如果發生了結合可以從以上兩個方面考慮,并采用相應的措施。


五、清洗與再生

QuikSep LH-20凝膠介質在使用一段時間后有可能柱效下降,分離效果變差,可采用下面的流程進行清洗和再生。

用蒸餾水沖洗2 個柱體積

1M NaCl 沖洗1 個柱體積

0.2M NaOH 沖洗1 個柱體積

用蒸餾水沖洗4 個柱體積


六、滅菌

溶脹后的QuikSep LH-20 可以使用121高壓滅菌30min,或者采用0.5M NaOH 處理30min 達到滅菌的目的。


七、儲存

干粉QuikSep LH-20 在陰涼干燥處密閉存放,防止吸潮;溶脹后的QuikSep LH-20 儲存于20%乙醇中,為了防止乙醇揮發以及微生物生長,建議3個月更換一次新鮮的20%乙醇,保存在4~8環境中的效果更好。


八、銷毀與回收

由于QuikSep LH-20 系列介質在自然界很難降解,為了保護環境建議采用焚燒處理。






產品名稱

貨號

包裝

QuikSep LH-20

QS121305

25g


QS121307

100g


QS121311

500g


QS121312

1kg


QS121313

5kg


QuikSep LH-20.pdf


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